Télécharger Rk B5

Purification de virus. La purification CsCl a été effectuée comme décrit précédemment (42). Brièvement, des monocouches de cellules RK13 ont été infectées à 10 PFU par cellule, comme décrit ci-dessus. À 18 h p.i., le milieu a été retiré des cellules infectées. Des cellules détachées et de plus gros débris ont été éliminés par centrifugation à basse vitesse. Les virions dans le milieu ont été centrifugés à l`aide d`un coussin de saccharose à 36%, resuspendus dans un tampon de gonflement avec sonication et regroupés sur un gradient d`étape CsCl préformé comme décrit précédemment. Les gradients ont été fractionnés à partir du bas du tube, et la quantité de radiation présente dans chaque fraction a été déterminée par comptage de scintillation. Ces travaux ont été soutenus par les subventions AI54392 et AI067391 des instituts nationaux de la santé. À l`exception de la F13, aucune des protéines du VEI n`est prévue pour avoir des fonctions enzymatiques et, par conséquent, elles agissent probablement comme échafaudage pour d`autres protéines virales ou cellulaires qui servent à la médiation de l`enveloppement intracellulaire. On a décrit les interactions entre A33 et A36 (33, 47), A34 et B5, A34 et A36 (33), A33 et B5 (29) et B5 et F13 (27).

À l`exception de l`interaction A33-A36 (44, 47), on connaît peu les fonctions que ces interactions ont durant la morphogenèse. A33 est pensé pour exiger B5 pour incorporation dans ev (29). Nos données suggèrent que B5 exige A34 pour incorporation dans ev et donc que A33 devrait exiger A34, par B5, pour l`incorporation dans ev. Puisque les interactions entre A33 et A34 ont également été signalées, il sera intéressant de voir si ces trois protéines forment un complexe trimère ou s`associent indépendamment. La protéine A34 est une glycoprotéine membranaire intégrale de type II de 24 à 28 kDa et elle est impliquée dans la rétention de CEV sur la surface de la cellule (6, 24, 46). La délétion de A34R provoque une augmentation de la production de Vee avec une infectiosité spécifique réduite. Le domaine extracellulaire de A34 a une homologie avec le lectines de type C, et une mutation ponctuelle dans ce domaine, trouvée dans la souche IHDJ du virus vaccine, explique une augmentation de 50 de la libération de Vee (3). Alors que la caractérisation phénotypique des virus recombinants qui contiennent des délétions de A34R a été effectuée, un mécanisme spécifique de défaut n`a pas été caractérisé. Dans ce rapport, nous utilisons un virus recombinant qui exprime la protéine fluorescente B5-verte (B5-GFP) pour analyser les défauts de morphogenèse lorsque le gène A34R est supprimé. La caractérisation subcellulaire révèle que B5 exige A34 pour un ciblage approprié du réticulum endoplasmique (er) au site de l`emballage et l`inclusion dans la progéniture virions.